Worthington酶類主要是膠原酶類,胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,彈性蛋白酶,和脫氧核糖核酸酶。其溫和的蛋白水解作用使該酶特別適用于制備原代細胞和次級(亞培養(yǎng))細胞培養(yǎng),因為它對細胞膜溫和。這種蛋白酶也用作細胞分離和組織分離應(yīng)用中的二級酶,通常與膠原酶一起使用。
酶的特異性:
酶的特性之一使它們作為診斷和研究工具如此重要,是它們相對于它們催化的反應(yīng)表現(xiàn)出的特異性。一些酶表現(xiàn)出的特異性;也就是說,它們只會催化一種特定的反應(yīng)。其他酶將特異于特定類型的化學(xué)鍵或官能團。
一般來說,有四種不同類型的特異性:
1、特異性——酶只催化一種反應(yīng)。
2、組特異性——酶只作用于具有特定官能團的分子,如氨基、磷酸鹽和甲基。
3、連接特異性——無論分子結(jié)構(gòu)的其余部分如何,酶都會作用于特定類型的化學(xué)鍵。
4、立體化學(xué)特異性-酶將作用于特定的空間或光學(xué)異構(gòu)體。
Worthington酶類已經(jīng)建立了幾種類型的粗膠原酶:類型1、2、3和4。
1型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
2型含有較高相對水平的蛋白酶活性,尤其是梭菌蛋白酶。
3型含有Z低水平的二級蛋白酶。
4型被設(shè)計成胰蛋白酶活性特別低,以限制對膜蛋白和受體的損害。
Worthington膠原蛋白酶用途:
通常用于分離皮膚表皮和真皮層,留下完整的上皮層和干細胞、肝細胞和其他細胞分離應(yīng)用。然而,由于所涉及的變量的多樣性,應(yīng)根據(jù)經(jīng)驗確定每個細胞/組織應(yīng)用的確切隔離條件。
粗膠原酶廣泛用于酶促原代細胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員要么使用粗制膠原酶制劑,例如 1、2、3 和 4 型,要么使用色譜純化的膠原酶;后者通常與二級酶如彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等結(jié)合。為了獲得最佳結(jié)果,必須針對要解離的組織調(diào)整蛋白水解活性的較精確混合。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性很好,但并不完mei,并且可能部分取決于使用參數(shù)和目標以及批次間的差異。