透析會產生更多變化的結果;在我們的實驗室中,嘗試通過透析將未結合的金納米粒子與蛋白質和抗體結合物分離,導致金降解,有時還會導致蛋白質大量損失;因此,我們不推薦通過透析來分離偶聯(lián)物。
膜離心可能有用,特別是在標記非常大的蛋白質時;截留分子量為 50,000 或 100,000 的微量濃縮器將允許 undecagold 和 Nanogold® 穿過膜。
選擇您的凝膠過濾介質
選擇一種凝膠,它可以最好地分離金結合物和過量存在的組分:這將是一種凝膠,其中結合物的 MW 接近 MW 分級范圍的頂部,過量的試劑(無論是金納米顆粒或未標記的較小分子)接近該范圍的底部。注意:如果您擔心聚集的可能性,請選擇 MW 范圍上限明顯高于金納米粒子偶聯(lián)物 MW 的凝膠。
Nanogold® 標記的 Fab' 片段的分離示例如下所示:
所需產物(灰色陰影)與較大的 F(ab') 2綴合物和過量未結合的 Nanogold® 分離。要獲得更高的純度,應將 12-14 級分合并并再次分離。
要對凝膠或印跡進行染色以獲得清晰、快速的肉眼結果:
銀增強方案:
使用 LI Silver 對 Nanogold® 標記的分子進行凝膠染色
使用GoldEnhance Blots
增強 黃金 在許多情況下,黃金顯影劑優(yōu)于白銀。